Analiza PCR pentru fiabilitatea HIV. Cercetare PCR - diagnostic modern al HIV, SIDA. Pentru cine este PCR-ul?

Virusul imunodeficienței umane este una dintre cele mai teribile boli ale secolelor trecute și prezente. Studiul său, căutarea de vaccinuri și medicamente dau anumite roade. Cu toate acestea, până în prezent, specialiștii din domeniul medicinei nu au reușit să învingă complet această afecțiune periculoasă. Metode moderne diagnosticele permit nu numai identificarea virusului imunodeficienței într-un stadiu incipient, ci și controlul cursului bolii în viitor. Pentru a lua o decizie cu privire la necesitatea aplicării unei anumite terapii, se utilizează analiza ARN HIV. Este folosit și pentru a identifica această boală... Este important de menționat că analiza ARN HIV nu este omniprezentă. Aplicați-l numai dacă este necesar. Cum se realizează un astfel de studiu, în ce cazuri este utilizat și care este fiabilitatea acestuia?

Virusul HIV prin ARN: esența studiului

Înainte de a vorbi despre modul în care este determinat ARN-ul HIV, este necesar să aflăm ce reprezintă această abreviere și ce rol joacă în organism. Acidul ribonucleic este o moleculă care se găsește în toate organismele vii și în unele infecții virale... Sinteza acestei molecule se bazează pe matricea dezoxiribo acid nucleic... Anumite enzime sunt responsabile de aceste procese. Este polimeraza acidului ribonucleic.

Esența acestui tip de cercetare este verificarea materialului genetic al virusului. Pentru a efectua un test ARN pentru HIV, profesioniștii din domeniul medical folosesc reacția în lanț a polimerazei. PCR vă permite să înmulțiți volumele de material biologic folosit pentru cercetare, datorită căruia se verifică în mai multe etape folosind o metodă comparativă. Trebuie remarcat faptul că ARN PCR este utilizat nu numai pentru HIV. Această tehnică vă permite să identificați un număr mare de boli ereditare, unele viruși și infecții. De asemenea, este folosit pentru a determina patologii genetice ereditare. Sperma, saliva și sângele sunt folosite ca material biologic. În cazul virusului imunodeficienței, serul și plasma sanguină sunt considerate materialul preferat.

Testul HIV ARN se efectuează în mai multe etape. După ce se prelevează sângele pacientului, acesta este trimis la laborator. Materialul biologic este plasat într-un reactor special, unde este degradat. Pentru sinteza se folosesc enzime speciale. Mai mult, în condiții create artificial, două molecule de ARN sunt sintetizate dintr-o moleculă de ARN, patru din două și așa mai departe. Când se atinge numărul necesar, se face o comparație cu diferite tipuri de viruși. Apropo, la ieșirea dintr-o moleculă de acid ribonucleic se obțin câteva sute sau mii de molecule. ARN HIV ultrasensibil este de mai multe tipuri. Totul depinde de scopul studiului.

HIV ARN 20 UI / ml: acuratețea și fiabilitatea metodei, tipuri

În medicina modernă, sunt utilizate două metode pentru a studia acidul ribonucleic. Este vorba despre ARN-ul HIV cantitativ și calitativ. Ambele moduri de cercetare sunt similare, dar servesc unor scopuri diferite. Cantitativ ARN HIV este o definiție încărcătura virală... Numărul de molecule virale din țesutul genetic poate spune multe. În special, în ce stadiu se află boala acest moment... Toată lumea știe că virusul imunodeficienței are mai multe dintre ele. După debutul seroconversiei, numărul de celule ale virusului crește, iar detectarea acestuia devine posibilă. În stadiile inițiale ale bolii, ARN-ul HIV cantitativ, a cărui normă este stabilită în laborator, permite nu numai detectarea virusului imunodeficienței, ci și luarea unei decizii cu privire la necesitatea terapiei antiretrovirale. După ce a determinat încărcătura virală cantitativă, specialistul poate decide ce regim de terapie trebuie utilizat de pacient.

Este adesea folosit ARN HIV de calitate pentru nou-născuți. Poate fi efectuată și la adulți, de exemplu, pentru a determina tipul de virus. Dar costul unei astfel de cercetări nu permite implementarea acesteia în toate instituțiile medicale. Prin urmare, este utilizat în pediatrie și neonatologie.

Fiabilitatea ARN HIV, realizată cu o sensibilitate de 20 UI / ml, este ridicată. Este aproximativ nouăzeci și unu la sută. Cu toate acestea, în medicina modernă există metode, a căror fiabilitate este mai mare. De aceea, imunotestul enzimatic sau blotting imun este utilizat pentru a determina prezența sau absența acestui diagnostic. Fiabilitatea lor este ceva mai mare. Este nouăzeci și opt - nouăzeci și nouă la sută.

Dacă vorbim despre cel mai optim moment al controlului, atunci medicii îl prescriu la cel puțin o lună după infectare. Dacă scopul principal este de a determina dacă un pacient are acest diagnostic, nu merită să analizăm ARN-ul HIV după 4 săptămâni, fiabilitatea acestuia poate fi inexactă. Cel mai bine este să faceți acest lucru în cinci până la șase săptămâni.

Dacă nu se găsește ARN HIV, ce înseamnă asta? Această întrebare este adesea adresată de profesioniștii medicali. Acest lucru poate însemna că nu există virusul imunodeficienței sau că testul a fost făcut prea devreme.

Detectarea ARN HIV la nou-născuți: cât de eficientă este?

Metoda preferată de screening a nou-născuților pentru prezența sau absența virusului imunodeficienței dacă aceștia sunt născuți dintr-o mamă infectată este analiza acidului ribonucleic. În acest caz, HIV ARN 20 UI/ml este produs în primele 10 zile de viață ale bebelușului. De asemenea, este posibil să se identifice prezența bolii cu ajutorul unui test imunosorbent legat de enzime. Cu toate acestea, medicii se confruntă cu o altă provocare. Este vorba despre necesitatea de a determina ce anticorpi produce organismul bebelusului. Faptul este că un copil născut dintr-o mamă infectată le va avea oricum. Cu toate acestea, uneori este doar protecția sistemului imunitar, și nu faptul de infecție. Precizia PCR HIV ARN este verificată din nou după 6 luni.

Potrivit statisticilor OMS, în ultimii 40 de ani, 25 de milioane de oameni au murit din cauza SIDA. Daunele de la această infecție sunt colosale. Cei mai mulți dintre cei infectați s-au dovedit a fi în țări africane, de unde a provenit această infecție. Cu HIV, diagnosticul bolii devine deosebit de important. Este adevărat că mijloacele de tratare a HIV nu au fost încă create, dar terapia precoce poate prelungi viața pacientului și poate îmbunătăți calitatea acesteia.

Diagnosticul infecției cu HIV

Infecția cu HIV este determinată în diferite etape prin următoarele metode:

• ELISA - test imunosorbent legat de enzime.
• Western blot.
• PCR - polimerază reacție în lanț.
• Teste exprese.

Metoda PCR a fost dezvoltată de biochimistul american Carey Mullis, care a primit Premiul Nobel pentru aceasta în 1983. Astăzi, această metodă în medicină în diagnosticarea tuturor infecțiilor este considerată cea mai importantă datorită acurateței și conținutului de informații. HIV nu face excepție în acest sens.

Esența analizei

Orice celulă vie conține ARN și ADN. Acești acizi nucleici sunt capabili de auto-copiere și auto-replicare. Fragmentele de ADN sunt unice pentru fiecare infecție. Aceste fragmente de acid nucleic circulă în fluidele biologice. Sunt prinși și recunoscuți de echipamente speciale - un reactor. Aceasta este baza metodei. Asistentul de laborator numără aceste fragmente. Retrovirusul HIV este monitorizat pentru ARN. Chiar și cu copii unice ale particulelor virale, PCR le poate detecta și număra.

Sângele venos este cel mai adesea folosit ca fluid de testare. Componentele speciale ale metodei intră în contact cu particulele virusului și le fac detectabile, deoarece există o creștere multiplă a fragmentelor găsite.

În cazul HIV, rezultatul prezenței virusului poate fi obținut cu mult înainte de apariția clinicii. Prin urmare, datorită sensibilității sale ridicate, PCR are o valoare diagnostică atât de mare. Un mare plus al PCR constă în versatilitatea metodei. Perioadă de incubație infectiile pentru PCR nu sunt un obstacol.

Costul cercetării

Metoda PCR este destul de costisitoare. Acesta este unul dintre marile sale dezavantaje. Pentru a-l realiza, aveți nevoie de echipamente de ultimă generație și de o înaltă calificare a unui medic de laborator. În virtutea celor de mai sus, diagnosticul PCR nu este efectuat în mici aşezări... Puteți efectua analiza doar în clinici mari specializate.

Costul determinării ADN-ului HIV în clinicile din Moscova este de la 2.800 de ruble, determinarea încărcăturii virale (ARN viral în plasmă) prin PCR - de la 8.800 de ruble și rezistența HIV la inhibitorii de protează - de la 16.500 de ruble. După cum puteți vedea, prețurile sunt destul de mari. PCR poate fi efectuată gratuit în clinicile de stat în cadrul poliței de asigurare medicală obligatorie. Este important ca procedura să se poată face anonim. La receptie, pacientul primeste un numar prin care poate afla rezultatul. În centrele medicale moderne există conturi personale ale clienților, unde vor fi introduse aceste date.

Obiectivele cercetării

Diagnosticul PCR pentru HIV este prescris în astfel de cazuri:

• Identificarea unei infecții la un copil născut dintr-o mamă bolnavă sau purtător în scopul determinării infecției intrauterine.
• Dacă ELISA a dat rezultate dubioase (PCR pentru HIV ajută în acest caz la stabilirea unui diagnostic final).
• Pentru a identifica conținutul cantitativ al virusului în organism.
• Cu imunoblotting pozitiv, se completează reciproc cu PCR.
• Testarea donatorilor.
• Pentru diagnosticul precoce al HIV.
• Pentru a determina eficacitatea și rezistența la ART.

Avantajul acestei analize este că PCR pentru HIV poate fi efectuată chiar și pentru copiii sub un an.

Studiul este adesea efectuat nu pentru diagnosticul primar, ci deja în cursul tratamentului. Diagnosticele primare sunt testele serologice (acestea determină nivelul de anticorpi împotriva HIV). Dacă rezultatul este fals, se repetă - aceasta poate fi cu o încărcătură virală scăzută.

PCR diagnostichează HIV atunci când nu există încă anticorpi împotriva acestuia. În acest caz, metoda ELISA nu va da un răspuns.

Iar PCR pentru HIV va fi deja pozitiv. Dar simptomele acestei perioade de HIV sunt nespecifice. La început, pacientul este tratat pentru o lungă perioadă de timp și fără succes pentru ARVI de către un terapeut. Trebuie avut în vedere că nu se pune diagnosticul HIV numai pe baza PCR, este necesar să se supună altor teste complexe. Metoda PCR este adesea folosită ca metodă auxiliară pentru cazurile complexe.

Pregătirea pentru analiză

Înainte de a face un PCR pentru HIV, cu 2 zile înainte de analiză, nu trebuie să consumați alimente grase, alcool. De asemenea, este mai bine să nu te încordezi psihic și fizic. Dacă pacientului i se prescrie un curs de imunostimulare, acesta este oprit cu 2 săptămâni înainte de analiză.

Este mai bine să donezi sânge dimineața. Se pot examina și alte fluide biologice ale corpului (sperma, secreții vaginale), dar cel mai bun material este sângele. Saliva, transpirația, urina și lacrimile nu sunt utilizate, deoarece conținutul de virus în ele este minim.

Avantajele PCR pentru HIV

Avantajele metodei sunt probabilitatea extrem de scăzută a unui rezultat fals pozitiv, universalitatea reacției pentru orice fluide biologice ale corpului. Analiza are o gamă largă:

• O singură probă de sânge poate fi utilizată pentru a verifica diferite infecții.
• Tehnica este urgentă, rezultatul este gata a doua zi.
• Fiabilitatea variază de la 85 la 98%.
• Prezența HIV poate fi determinată la 10-14 zile după infectare (în acest moment nu există anticorpi).
• Nu există restricții de vârstă, o puteți efectua chiar din momentul nașterii.

Contra metodei

Dezavantajele PCR sunt următoarele:

• Analiza costisitoare.
• Este necesar echipament medical sofisticat.
• Este necesară o calificare înaltă a unui asistent de laborator și a unui medic care efectuează analizele.
• Reacția este foarte sensibilă, astfel încât eroarea poate fi de 20%.
• Se poate dovedi a fi fals rezultat pozitiv dacă pacientul are procese autoimune, oncologie, infecții cronice.
• Este necesară o curățenie specială a laboratorului, deoarece virusul poate intra în analiză din aer. Atunci rezultatul va fi greșit.

Pentru laboratoarele în care se efectuează PCR, au fost dezvoltate măsuri speciale stricte conform sistemului SanPiN de control intern pentru îmbunătățirea calității diagnosticului. În plus, trebuie respectate toate regulile de lucru cu această tehnică:

• Este necesar să respectați cu strictețe informațiile de pe eprubete.
• Înainte de a lua sânge, priviți din nou și asigurați-vă că analiza este prescrisă.
• Asistenta trebuie să facă etichetarea corectă a tuburilor.
• Medicul de laborator trebuie să efectueze corect toate manipulările cu biomaterialul pentru a preveni contaminarea încrucișată.
• Sistemul de testare trebuie să fie de o calitate excelentă.

Doar dacă toate aceste condiții sunt îndeplinite, eroarea de răspuns poate fi de doar aproximativ 2% din episoade.

Durata analizei

Mulți sunt interesați de cât timp va dura pentru ca PCR HIV să fie gata. Diagnosticul nu durează mai mult de 8 ore. Pacientul poate primi un răspuns chiar a doua zi. Testarea rapidă se efectuează în 2 ore.

Fiabilitatea PCR

În ciuda numeroaselor sale avantaje, PCR nu este considerată o metodă de diagnostic ideală. Ei apelează la el dacă este necesar să primească teste de screening pentru prezența HIV în organism.

Când se ia sânge pentru analiză?

Cât timp durează pentru a face o PCR HIV? Un rezultat fiabil poate fi obținut deja atunci când luați sânge la 4-4 zile după presupusa infecție. După 2 săptămâni, fiabilitatea pentru HIV va fi de 98%, iar cu o perioadă de 5 zile - 80%. Prezența PCR pe rezultat va fi de încredere, dar pentru un rezultat absolut precis, se efectuează și ELISA.

Un test ELISA va fi eficient doar în prezența anticorpilor împotriva virusului, acest timp poate dura de la 1-3 luni până la șase luni. Deoarece ELISA oferă o probabilitate mai mare (98% -99,9%), PCR nu poate fi numit un test de confirmare 100% pentru infecția cu HIV. Dar, pe de altă parte, aceasta este singura tehnică în care nu este nevoie să așteptați apariția anticorpilor.

Cu HIV, metoda PCR poate fi folosită pentru a obține informații despre eficacitatea ART, stadiul bolii HIV și cantitatea de VL (evaluarea cantitativă a prezenței HIV în organism). Aceasta va indica gravitatea și amploarea modificărilor.

De asemenea, este necesar să se treacă teste pentru PCR pentru HIV dacă există anticorpi în sânge, dar prezența lor nu indică fiabilitatea infecției cu HIV din punct de vedere clinic.

Sunt testați nu numai pentru infecție și actul sexual ocazional. Alte motive:

• Planificarea sarcinii.
• Operațiune viitoare.
• Relații sexuale ocazionale.
• Unele profesii necesită trecerea acestei analize pentru admiterea în muncă (profesori, medici și altele personal medical).
• Prizonieri.
• bolnavi de TBC.
• Angajații Ministerului Situațiilor de Urgență și ai poliției.
• Întoarcerea din țări exotice după vacanță (dacă doriți, asigurați-vă că nu există infecție).
• Prostituate.
• Studenți străini.
• Dependenti de droguri.

De asemenea, anumite simptome la pacient pot forța efectuarea unui test HIV:

• Pierdere bruscă în greutate.
• Diaree care durează mai mult de 3 săptămâni.
• O creștere nerezonabilă a temperaturii pentru o lungă perioadă de timp.
• Noduli limfatici umflați.
• Cauza nedeterminată a pneumoniei, candidozei etc.

Descifrarea analizei este apanajul medicului curant, nu a asistentului de laborator.

PCR sau ELISA, care este mai bine?

Când ARN-ul virusului este detectat atât calitativ, cât și cantitativ. Acest test identifică clar un agent patogen specific chiar dacă există mai multe reacții încrucișate. Materialul biologic poate fi folosit chiar și atunci când este uscat. Dezavantajul este sensibilitatea ridicată a PCR, când un rezultat fals pozitiv poate fi dat de prezența chiar și a unei cantități minuscule de ADN străin pe instrumente sau eprubetă.

Sarcina și posibilitatea ELISA este de a determina prezența anticorpilor la un retrovirus. Deși este 99% precis, primele etape nu este aplicabil.

Test calitativ HIV

Efectuarea unei PCR de înaltă calitate pentru HIV determină prezența virusului în organism. Rezultatele în acest caz vor arăta astfel: pozitiv, fals pozitiv, negativ. Dar acest studiu nu va furniza informații despre cantitatea de retrovirus. Astfel de analiza calitativa inadecvat atunci când infecția cu HIV în organism a fost deja identificată în alte moduri.

Este imposibil de controlat eficacitatea tratamentului cu PCR de înaltă calitate.

Analiza cantitativă pentru HIV

Se efectuează numai pentru persoanele infectate cu HIV pentru a număra numărul de copii ale virusului ARN dintr-un produs biologic.

Scopul unui astfel de studiu este de a monitoriza tratamentul în curs și de a identifica rezistența virusului la acesta. Terapia antivirală în astfel de calcule nu este prescrisă orbește de un medic, așa că va fi mai eficientă. PCR cantitativ pentru infecția cu HIV se face mult mai des. Acest test este afișat cu o copie/ml de sânge.

Ce rezultate pot fi date:

• ARN viral este absent sau foarte puțin (aproximativ 20 de copii/ml). Nu există certitudinea diagnosticului.
• De la 20 la 10 copii de gradul 6 / ml - diagnosticul este de încredere.
• Mai mult de 10 până la 6 copii / ml - VL mare.

Laboratoarele pot efectua analize PCR HIV în timp real. Aceasta presupune observarea și evaluarea numerică a acumulării de produse PCR cu fixarea automată a rezultatelor.

Una dintre cele mai grave boli care nu s-a învățat încă să vindece este cauzată de virusul imunodeficienței umane.

Găsirea agentului patogen în organism nu este ușoară: în prezent, sunt folosite doar câteva metode de cercetare pentru aceasta.

Un astfel de test este - reacția în lanț a polimerazei (PCR).

Pentru a înțelege încercarea metodei reacției în lanț a polimerazei, trebuie să vă amintiți particularitățile structurii celulelor din cursul școlar.

Orice celulă vie conține proteine ​​și două tipuri de acizi nucleici: ADN și ARN. Sunt cele mai importante structuri celulare, deoarece conțin informații genetice codificate într-un mod special.

Un cod ADN este o secvență strictă de microstructuri care formează un lanț lung.

Referinţă! Ca bază pentru PCR, este utilizată capacitatea unui acid nucleic de a se reproduce independent.

Când un virus intră în celulele sănătoase, distruge firele de ADN.

În acest caz, celula nu va mai conține lanțuri integrale, ci doar fragmente mici - nucleotide. În plus, chiar și cele mai mici particule de virus vor fi vizibile.

Metoda reacției în lanț a polimerazei este construită pe baza detectării catenelor de ADN deteriorate și a celulelor reziduale.

În acest caz, există două tipuri de diagnosticare PCR:

• Calitate superioară... Potrivit pentru cei al căror diagnostic nu este confirmat: arată pur și simplu dacă virusul este prezent în celule.
• Cantitativ... Pacientul primește rezultatul „ADN virusului nedetectat”, ceea ce înseamnă absența HIV, sau informații despre prezența agentului patogen, ceea ce înseamnă că persoana este infectată cu HIV.

Dacă există un diagnostic confirmat, se atribuie o analiză cantitativă. Cu ajutorul acestuia, se determină numărul de copii ale ARN-ului (ADN) virusului din sânge (celule). Analiza cantitativă face posibilă evaluarea eficacității tratamentului la persoanele infectate cu HIV, pentru a determina severitatea bolii și progresia acesteia.

Ce metode de diagnosticare pot detecta infecția cu HIV sunt descrise în videoclip:

Avantajele și dezavantajele acestei metode de diagnostic

Ca și în cazul oricărei măsuri de diagnosticare, PCR are avantajele și dezavantajele sale.

Avantajele metodei includ:

• Fiabilitate ridicată. Cu PCR, este posibil să se detecteze cele mai mici rămășițe ale virusului, probabilitatea de a detecta agentul patogen ajunge la 80% în 4-5 zile după infectare, 100% - în 14 zile după infecție. Deci, cea mai mare acuratețe se obține atunci când se studiază ADN-ul virusului în celulele sanguine: este posibil să se detecteze un virus cu cantitatea sa de 1-5 copii la 1 milion de celule.
• Capacitatea de a utiliza diverse biomateriale(Saliva, urina, transpirația și lacrimile nu sunt potrivite pentru PCR, dar pot fi folosite sânge, material seminal și secreții vaginale de la femei).
• Capacitatea de a analiza diferite boli pe un eșantion. Cu ajutorul PCR se pot depista HIV, chlamydia, herpes, citomegalovirus, ureaplasma, micoplasma, gonoreea, trichomonaza, toxoplasmoza.
• Viteza mare a rezultatelor. Există un examen PCR expres, care vă permite să aflați rezultatele diagnosticului în câteva ore.
• Sensibilitate crescută: PCR, spre deosebire de, de exemplu, ELISA, ajută la detectarea virusului deja în primele săptămâni după infectare.
• Posibilitatea de a obține rezultate în câteva zile după infectare. Când este infectat, virusul poate fi determinat după 5-14 zile, în timp ce ELISA este recomandabil numai după 6 săptămâni.
• Fără restricții de vârstă. PCR poate fi efectuată atât la adulți, cât și la copii din momentul nașterii.

Principala caracteristică a analizei PCR este că detectează nu anticorpii împotriva virusului, ci virusul în sine.

Există doar câteva dezavantaje față de avantaje:

• Cost ridicat.
• Probabilitatea de a obține rezultate fals pozitive este de aproximativ 20%. Acest lucru se întâmplă de obicei din vina personalului (erori în colectarea sau transportul biomaterialului, în studiul biomaterialului și decodificarea rezultatelor).
• Necesitatea utilizării echipamentelor avansate de înaltă tehnologie, care este echipată cu doar câteva clinici.

Atenţie! Evident, tehnica are mult mai multe avantaje decât dezavantaje. Este deosebit de important ca cu ajutorul PCR să fie posibilă identificarea bolii în stadiul inițial de dezvoltare și începerea tratamentului la timp.

Rezultatul analizei PCR poate fi pozitiv încă de la 14-21 de zile după o posibilă infecție. Dar dacă testul este negativ, acest lucru nu garantează absența infecției. Este mai bine să efectuați un test de confirmare cu o miere ELISA după 2 săptămâni.

Cum se efectuează testul HIV PCR este descris în videoclip:

Cine este repartizat?

În primul rând, PCR este prescrisă pentru infecția cu HIV suspectată. Tehnica poate fi indicativă și pentru depistarea bolilor cu transmitere sexuală, a bolilor ereditare.

Referinţă! Diagnosticarea PCR este adesea efectuată la inițiativa unei persoane care nu a prezentat simptome ale bolii, dar există o presupunere și îngrijorare cu privire la o posibilă infecție, de exemplu, după un act sexual neprotejat, transfuzie recentă de sânge, contact cu o persoană infectată.

Cine altcineva este indicat pentru sondaj?

• Persoane care au fost testate pozitiv pentru ELISA de două ori. PCR va face posibilă stabilirea unui diagnostic definitiv.
• Donatorii care plănuiesc să doneze sânge.
• Persoanele care au confirmat diagnosticul prin Western blot. Imun blotting este o metodă de diagnosticare a SIDA și se face de obicei împreună cu PCR.
• Persoanele aflate în stadiul de tratament pentru boli cauzate de HIV. PCR vă permite să evaluați eficacitatea terapiei.
• Nou-născuți a căror mamă este seropozitivă (transmiterea virusului are loc în aproximativ 30% din cazuri). Încă de la 2-3 săptămâni după naștere, este posibil să se stabilească dacă a apărut o infecție.

Unii oameni sunt testați pentru profilaxie, dar acest lucru este rar deoarece costul unui test PCR este mare.

Cât durează analiza și unde o pot duce?

Analiza PCR HIV se efectuează în conditii de laborator.

Prelevarea de sânge în sine se face în 5-10 minute, iar a doua zi rezultatele sunt gata.

Atunci când alegeți diagnostice expres (de exemplu, în laboratoarele „Invitro” sau „Gemotest”), interpretarea rezultatelor de către un specialist durează doar 2 ore.

În clinicile private, diagnosticarea, dacă se dorește, poate fi efectuată în mod anonim. Pentru a face acest lucru, trebuie să informați despre acest lucru în timpul unei vizite personale: fiecărui pacient i se atribuie un număr de serie și i se oferă acces la un cont personal. Apoi persoana poate afla rezultatele chiar și fără o a doua vizită la laborator.

Fiabilitatea rezultatelor studiului PCR este descrisă în videoclip:

Costul cercetării

Diagnosticele PCR nu sunt ieftine, deoarece necesită anumite echipamente avansate, precum și cunoștințele speciale ale unui specialist.

Echipamentul este disponibil doar în unele laboratoare medicale, ceea ce face posibilă stabilirea unui cost ridicat de analiză.

Costul mediu al unei cercetări este de 3000-5000 de ruble. În unele regiuni, costul nu depășește 1500-2000 de ruble.

Deoarece există posibilitatea unor rezultate fals pozitive și fals negative, sau persoana a făcut cererea prea devreme (virusul nu a rupt încă structura ADN-ului, dar este deja prezent în organism), poate fi necesar să se retesteze.

Costul ridicat se datorează și faptului că pentru diagnosticare sunt necesare o serie de componente:

1. O bucată de ADN (șablon) destinată amplificării;
2. Două amorse;
3. Polimeraza este o componentă activă din punct de vedere chimic care accelerează exponențial creșterea numărului de particule virale;
4. Trifosfați dezoxiribonucleozidici;
5. Particule de magneziu divalent încărcate;
6. O soluție specială în care se realizează procesul de polimerizare. Această soluție este concepută pentru a menține un nivel adecvat de aciditate, concentrație de sare și cantitatea de magneziu din lichid.

De asemenea, în timpul studiului este necesară o cantitate mică de vaselină: conține grăsimi și fierbe la temperaturi ridicate, ceea ce protejează proba studiată de supraîncălzire.

Analiză

Potrivite pentru analiză sunt sângele, materialul seminal și scurgeri vaginale... Obișnuit, sângele venos este folosit mai des.

Prelevarea de sânge se face dimineața pe stomacul gol.

În plus, trebuie să vă pregătiți pentru analiză:

• Cu 2-3 zile înainte de diagnostic, alimentele grase trebuie excluse din dietă.
• Alcoolul este exclus cu 1-2 zile înainte de analiză.
• Cu 2 săptămâni înainte de analiză, trebuie să încetați să luați medicamente imunostimulatoare.
• Ultima masă trebuie să aibă loc cu cel puțin 8 ore înainte de donarea de sânge.

La prelevarea sângelui dintr-o venă, îndoirea interioară a cotului este tratată cu o soluție specială, după care specialistul străpunge pielea, plasează acul seringii venoase și retrage cantitatea necesară de sânge. Apoi acul este îndepărtat, locul este din nou tratat cu alcool, pacientului i se dă un tampon de bumbac.

Pacientul trebuie să îndoaie brațul pentru un timp, astfel încât sângele să se oprească. Dacă o persoană se simte bine, poate merge imediat acasă. Pentru amețeli, greață și leșin, se acordă primul ajutor.

Asistentul de laborator plasează biomaterialul obținut într-un balon steril și îl trimite pentru diagnostic. Specialistul amestecă materialul biologic digerat într-un reactor special cu enzime care sintetizează diverse infecții.

Dacă în sânge există foarte puține particule de virus, atunci când interacționează cu enzimele, numărul acestora crește dramatic: reactivii se combină cu ADN-ul virusului și îl duplică.

Analiza se realizează în mai multe etape, deoarece diviziunea moleculelor are loc exponențial. Dintr-o celulă rezultă 2, de la 2 - 4 și așa mai departe.

Analizând opiniile și recenziile medicilor, putem spune cu încredere: în prezent, diagnosticul PCR este cea mai precisă metodă de testare a infecției cu HIV.

Referinţă! Cu ajutorul analizei, este posibil să se stabilească prezența unui virus în organism în decurs de câteva zile de la infectare, chiar dacă numărul de structuri virale este de doar 1-5 unități per milion de celule. Cu toate acestea, nu uitați de dezavantajele metodei, de exemplu, probabilitatea de a obține rezultate false pozitive.

Cu toate acestea, PCR rămâne unul dintre puținele teste care vă permit să diagnosticați boala la timp și să începeți tratamentul.

PCR pentru HIV este una dintre cele mai informative metode de diagnostic genetic molecular. Această metodă ajută la identificarea la pacient a tot felul de afecțiuni și boli infecțioase care sunt moștenite. Aceeași metodă de diagnostic este aplicabilă și în cazul testării unui biomaterial pentru prezența HIV, o boală gravă care se dezvoltă de-a lungul vieții pacientului. CU ajutor medical PCR a fost printre testele recomandate efectuate pe bază de plată pentru suspectarea virusului imunodeficienței umane. Cu toate acestea, fiabilitatea studiului se justifică doar în 80 din 100 de cazuri.

Diagnosticarea PCR pentru HIV înseamnă reacția în lanț a polimerazei. Pentru cercetări de acest tip, utilizați Tipuri variate materiale biologice. Printre acestea, sângele, în plus, secreția din vaginul pacientului poate fi folosită sau Lichid seminal la barbati.

Atenţie! Saliva pentru PCR nu este utilizată în diagnosticul HIV. Această abordare s-a dovedit a fi ineficientă, deoarece în acest material anticorpii împotriva HIV sunt la o concentrație minimă. Același lucru este valabil și pentru urină, transpirație și lacrimi.

Indicația pentru studiul descris este de două ori ELISA pozitiv(test imunosorbent legat). Vom vorbi mai târziu despre întâlniri alternative.

Detalii despre esența analizei

Testul PCR pentru HIV se bazează pe capacitatea unui acid nucleic de a se reproduce singur. Celulele vii sunt compuse din proteine ​​și chiar acești acizi, cu alte cuvinte, din ARN și ADN. Moleculele acționează ca gardieni ai codului genetic.
La o concentrație scăzută de particule virale (HIV) în biomaterial, proba nu include lanțuri întregi de ADN (acid dezoxiribonucleic), ci doar constituenții acestora, numiți nucleotide. Analiza vă permite să identificați chiar și resturile minore de celule virale. Acest fapt explică capacitatea PCR de a demonstra un rezultat pe întâlniri timpurii- la câteva săptămâni după infectarea cu HIV.

La examinarea sângelui venos trebuie așteptate rezultate de cea mai înaltă calitate din reacția în lanț a polimerazei. Proba este digerată cu ajutorul echipamentelor. Apoi fracțiile sunt supuse unui tratament enzimatic. Substanțele reactive, care se combină cu particule de ADN viral, îl dublează. Numărul acestor elemente crește în funcție de principiul lanțului până când prezența lor (nu a anticorpilor) în sângele pacientului devine vizibilă pentru asistenții de laborator. După exact același principiu, niciunul dintre modalități existente diagnostice.

Componente de reacție

Cu ajutorul metodei PCR, puteți afla în prealabil despre dezvoltarea virusului în organism. De ce nu poate fi numit popular în domeniul medicinei gratuite și făcut peste tot? Faptul este că un astfel de test HIV este foarte scump și necesită următoarele componente:

• o matrice de acid dezoxiribonucleic cuprinzând un segment de ADN care trebuie amplificat;
• doi primeri (pentru fiecare segment de lanț);
• o polimerază componentă chimic activă pentru a accelera polimerizarea particulelor virale;
• trifosfați dezoxiribonucleozidici;
• particule divalente de magneziu (încărcate);
• o soluție specială pentru crearea condițiilor favorabile, asigurând nivelul adecvat de aciditate, concentrația de sare, numărul de particule de magneziu din lichid.

Atenţie! Pentru a proteja proba de supraîncălzire, materialului se adaugă o cantitate mică de vaselin, care conține grăsimi și, în consecință, un punct de fierbere ridicat.

Indicatorul relativ ridicat al acurateței analizei se explică prin sensibilitatea sa crescută, care stimulează răspunsul la anticorpi la alți virusuri.

Avantajele și dezavantajele tehnicii HIV PCR

Pentru o evaluare obiectivă a metodei în tabelul de mai jos, prezentăm o serie de avantaje și dezavantaje ale studiului:

Evident, există mai multe avantaje ale tehnicii. Dacă evaluăm tipul de diagnostic din punct de vedere al productivității tratamentului ulterioar și al posibilității de prelungire a vieții pacientului, PCR este calea cea mai sigură către succes.

Caracteristici de analiză

Principala caracteristică a analizei descrise este capacitatea sa de a diagnostica precoce HIV, de care alte metode de cercetare nu sunt capabile. La câte zile după presupusa infecție poate fi donat sânge pentru PCR? De obicei, acest interval de timp este de 10-14 zile. În următoarele 24 de ore, pacientul primește rezultatul. Posibilele abateri în termeni sunt explicate de condițiile individuale de muncă ale centrelor și clinicilor de diagnostic.

Scopul studiului

Majoritatea PCR sunt efectuate pentru a detecta HIV (sindromul imunodeficienței umane). Cu toate acestea, analiza poate fi trecută și dacă bănuiți dezvoltarea bolilor cu transmitere sexuală. Aceeași metodă este aplicabilă și în cazul diagnosticării bolilor ereditare.

Diagnosticare PDR: motive pentru

Când ar trebui să donez sânge pentru PCR? În cele mai multe cazuri, materialul biologic este predat atunci când virusul imunodeficienței umane s-a adaptat la condițiile organismului, a stimulat producția de anticorpi și a provocat primele simptome ale HIV. Cu toate acestea, acest lucru este justificat numai dacă a trecut un timp suficient după infectare și implică un ELISA.

Necesitatea PCR apare la inițiativa pacientului care dorește să diagnosticheze rapid boala (dacă există). Motivul pentru aceasta poate fi: actul sexual neprotejat, contactul cu materialul biologic al unei persoane infectate, transfuzia recentă de sânge etc.

Cui i se atribuie PCR?

Determinarea infecției cu HIV prin PCR, la recomandarea unui specialist, se realizează în următoarele cazuri:

• diagnostic preliminar. PCR confirmă sau infirmă cu acuratețe rezultatul ELISA;
• Western blot a confirmat diagnosticul... Blotting imun este într-un mod suplimentar cercetarea SIDA . Ambele metode sunt utilizate împreună, ceea ce elimină probabilitatea unui diagnostic eronat;
• cu status HIV confirmat folosind PCR, efectul tratamentului selectat este monitorizat;
• pentru analiza donatorilor de sânge pentru prezența anticorpilor HIV;
• pentru a determina statutul HIV la un nou-născut atunci când mama este pozitivă la test. PCR în primele zile de viață vă permite să determinați infecția intrauterină sau infecția copilului în timpul trecerii prin canalul de naștere. Testul se efectuează la 2 până la 3 săptămâni după naștere.

Cât durează un test PCR și unde poate fi efectuat?

Un test HIV PCR este efectuat într-un laborator special. Testul în sine și interpretarea rezultatului nu durează mult: o lună sau chiar o săptămână. Durează până la 6 minute pentru a extrage sânge. În cazul obișnuit, un specialist nu va avea nevoie de mai mult de o zi pentru a diagnostica și a emite o concluzie. Primele 8 ore sunt studiul sângelui, timpul rămas este petrecut la înregistrare. Rezultatul poate fi recoltat chiar a doua zi după prelevarea probei. Termenul de testare expres este de 2 ore.

Atenţie! Politica OMS vă oferă posibilitatea de a susține testul gratuit în agenție guvernamentală sănătate.

Aproape orice laborator comercial este capabil să efectueze cercetări și pe o bază anonimă. Persoanei i se atribuie un număr special, la care rezultatele sunt apoi legate. Aceste informații sunt încărcate pe site-ul instituției la adresa Zona personală utilizator.

Cât costă să faci un test PCR?

Această metodă de a efectua cercetări este destul de costisitoare. Acest lucru se datorează faptului că este necesar să se efectueze PCR pe cele mai noi aparate medicale; manipularea necesită o cantitate suficientă de cunoștințe din partea specialiștilor.

Întrebarea presantă: cât costă o persoană să treacă un test PCR HIV? Acest lucru va necesita aproximativ 56-60 USD.

Analiză

Efectuarea unui test PCR HIV include:

• prelevarea de probe de sânge pentru cercetare;
• colectare suplimentară de spermă de la un bărbat și secreții genitale de la o femeie.

Atenţie! Drept urmare, testul permite medicilor să determine o încărcătură virală mare pentru a monitoriza starea pacientului.

Alte caracteristici ale acestui test HIV care merită luate în considerare:

• cu câteva zile înainte de test, pacientul ar trebui să reducă cantitatea alimente graseîn dietă;
• prelevarea de sânge se efectuează pe stomacul gol;
• enzimele care sintetizează diferite infecții sunt adăugate la materialele biologice divizate într-un reactor special;
• analiza se realizează în mai multe etape, deoarece diviziunea moleculelor are loc într-o progresie aritmetică. Un program special compară un număr mare de structuri celulare pentru a detecta HIV.

Metodele de diagnosticare precisă, care includ PCR, sunt costisitoare, dar sunt capabile să detecteze HIV într-un stadiu incipient. În tratamentul unor astfel de patologii, cel mai important lucru este un diagnostic corect și în timp util, care poate îmbunătăți calitatea vieții umane și durata acesteia.

V anul trecut Metoda de detectare a materialului genei HIV prin replicarea (amplificarea, reproducerea) unor secvențe de gene specifice, adesea combinate sub denumirea uneia dintre variantele acestei metode, „reacția în lanț a polimerazei” (PCR), a devenit foarte populară.

Metoda PCR (reacția în lanț a polimerazei) se bazează pe o proprietate unică a NK (atât ADN, cât și ARN) - capacitatea de a se auto-reproduce, care este reprodusă artificial in vitro. În acest caz, sunt sintetizate numai fragmente de NA strict specifice.

Factorul etiologic al infecției cu HIV sunt virusurile HIV-1 și HIV-2 (din engleza Human Immunodeficiency Viruses) din familia Retroviridae. Patogenia infecției cu HIV constă în infecția cu virus a celulelor cu fenotipul CD-4, care este inerent limfocitelor T-helper și altor celule ale corpului uman. Efectul citopatic direct al virusului imunodeficienței asupra acestor celule duce în cele din urmă la deces din cauza activării infecțiilor oportuniste sau a dezvoltării tumorilor.

Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV se efectuează în trei direcții:

diagnostic serologic markeri de virus prin test imunosorbent legat de enzime și imunoblot, care constă în determinarea antigenelor și anticorpilor împotriva HIV în serul sanguin.

determinarea NK virală(proviral-ADN sau ARN) prin PCR, atât în ​​sânge, cât și în celulele sanguine.

studiul stării imunitare(evaluarea cantitativă a limfocitelor CD-4), care se realizează cel mai adecvat prin citometrie în flux.

Este deosebit de necesar de remarcat importanța PCR în diagnosticul infecției cu HIV la copiii din primul an de viață. Diagnosticul precoce al infecției cu HIV la copiii de această vârstă este, în principiu, imposibil fără utilizarea PCR. Acest lucru se datorează faptului că un copil născut dintr-o mamă infectată cu HIV are în mod necesar anticorpi împotriva virusului imunodeficienței. Nu este posibil să se facă distincția între anticorpii materni și proprii împotriva HIV. La un copil neinfectat, acești anticorpi sunt eliminați sub influența propriului sistem imunitar până la vârsta de 6-9 luni, deși în unele cazuri pot circula până la 18 luni de viață, dar nu mai mult de această perioadă.

Trebuie remarcat faptul că o examinare PCR are sens doar dacă alaptarea copilul este mama seropozitiva din momentul nasterii, deoarece riscul de infectare este destul de mare și se ridică la aproximativ 5%.

Astfel, PCR permite diagnosticul diferențial al statutului HIV la copiii mici. Deci, dacă există un rezultat PCR pozitiv pentru NK al virusului imunodeficienței în primele 48 de ore de viață, atunci infecția cu HIV a avut loc în uter. Dacă există un rezultat PCR negativ în primele 48 de ore, dar devine pozitiv la vârsta de 7-14 zile de viață, atunci infecția a avut loc intrapartum.

În prezent, PCR permite nu doar diagnosticarea, ci și monitorizarea tratamentului infecției cu HIV prin determinarea concentrației de ARN în plasmă, precum și identificarea tulpinilor rezistente la chimioterapie ale virusului imunodeficienței. Determinarea „încărcăturii virale” în plasma sanguină este cel mai bun criteriu de prognostic pentru evoluția infecției cu HIV și pentru evaluarea eficacității terapiei antiretrovirale.

Modificările PCR cunoscute pentru diagnosticul infecției cu HIV ating o sensibilitate de doar 98%, adică detectează doar 98% din probele de la indivizi infectați cu HIV, ceea ce este semnificativ mai mic decât atunci când se utilizează ELISA (până la 99,9%). Din acest motiv, nu pot fi folosite ca teste de confirmare, deoarece vor da evident mai multe rezultate fals-negative decât imunoblotul. În practică, tehnica PCR se comportă ca fiind prea „sensibilă” la vibrațiile externe, iar în mâini inepte și în condiții de laborator insuficient de bine echipate, dă un număr considerabil de reacții nespecifice (fals-pozitive). Specificitatea PCR depinde și de selecția ingredientelor utilizate în ea, în special așa-numitele „amorsări”, care ar trebui să imite „secvențele genei HIV”, dar nu pot fi întotdeauna selectate cu acuratețe. O selecție nereușită poate duce, în special, la faptul că astfel de teste pot, cu diferite grade de succes, să detecteze diferite subtipuri de HIV-1, de exemplu, să detecteze subtipul B și să nu detecteze subtipurile A și G etc. Cu toate acestea, dezvoltarea acestor tehnici se desfășoară într-un ritm rapid și este posibil ca în curând să apară seturi de reactivi standard de calitate mai bună. În practică, medicii ar trebui să țină cont de caracteristicile operaționale ale testelor de diagnostic care le sunt oferite, presupunând inițial că valoarea lor de câmp (practică) poate fi semnificativ mai mică decât cea declarată de producători.

Avantajul teoretic al PCR este că este capabil să detecteze infecția cu HIV în perioada de incubație și perioada clinică timpurie, când anticorpii ar putea să nu fie încă prezenți. Cu toate acestea, încă nu este întotdeauna capabil să identifice cei infectați în mai multe perioadă târzie infectii. În viitor, acest lucru poate fi important și atunci când se încearcă diagnosticarea infecției cu HIV la persoanele care primesc terapie antiretrovială, când nivelul HIV din sânge scade semnificativ. Utilizarea combinată a două metode, care ar putea fi o cale de ieșire din această situație - ELISA și PCR, din păcate, vor face cercetările mult mai costisitoare, mai ales dacă sunt efectuate la scară de masă.

Detectarea HIV prin PCRîn sânge este posibil în două versiuni:

Detectarea ADN-ului provirus HIV în celulele mononucleare din sângele periferic;

Detectarea ARN HIV în fluidele biologice ale corpului (de exemplu, în plasmă sau ser).

Acum PCR pentru ADN-ul provirusului HIV este utilizat ca tehnică de diagnosticare pentru diagnosticul direct al infecției cu HIV în următoarele cazuri:

În perioada „ferestrei” serologice. Deși trebuie amintit! că sensibilitatea PCR pentru ADN-ul proviral HIV variază de la 96 la 99% și, prin urmare, în ciuda indicatorilor de sensibilitate ridicată, PCR ar trebui efectuată fie împreună cu ELISA, fie cu confirmarea ulterioară prin ELISA;

În cazul unui rezultat IS discutabil;

La examinarea copiilor născuți din mame infectate cu HIV. Utilizarea PCR în acest caz face posibilă reducerea timpului necesar pentru diagnosticarea infecției cu HIV de la 18 luni la 3-6 luni.