Se ia o analiză a PCR la femei. PCR: ce este? Diagnosticul bolilor infecțioase prin reacția în lanț a polimerazei. Pregătirea pentru diagnosticare

Diagnosticul PCR este o tehnică bazată pe utilizarea reacției în lanț a polimerazei, care poate fi utilizată pentru a examina o persoană pentru boli infecțioase și ereditare. Testele PCR pentru 12 infecții arată rezultatul, indiferent dacă boala este acută sau cronică. Unii experți consideră PCR 12 o analiză obligatorie și nu fac un diagnostic final fără aceasta. Rezultatele pot fi pozitive chiar cu mult înainte de apariția simptomelor bolii.

În secolul al XX-lea, Carey Mullis din Statele Unite a descoperit fenomenul reacției în lanț a polimerazei. În prezent, metoda PCR este standardul de aur în unele domenii ale medicinei. Metoda este cea mai eficientă pentru detectarea bolii în stadiul activ, deoarece există cazuri în care în stadiul activ, metodele convenționale nu dau un rezultat atât de precis.

Diagnosticul proceselor infecțioase folosind PCR este destul de relevant în lumea modernă. Avantajele acestui tip de sondaj sunt următoarele puncte:

Detectarea unui agent infecțios în analize. Analiza implică identificarea ADN-ului sau ARN-ului unui agent infecțios.
Reacțiile false și eronate sunt practic excluse.
Tehnica PCR 12 este cea mai sensibilă. Datorită acestei metode, pot fi detectate chiar și celule unice de agenți infecțioși.
Rezultatul PCR pentru agenții patogeni latenți este gata în decurs de 4 ore după procedură.
Capacitatea de a detecta agenți infecțioși fără absența simptomelor caracteristice pentru boală. Metoda este, de asemenea, destul de eficientă în cazul unei boli specifice.

În lumea modernă, diagnosticul PCR al infecțiilor se dezvoltă într-un ritm accelerat. Tehnica este îmbunătățită activ. Apar noi subspecii ale examinării PCR. Mulțumită dezvoltării aceasta metoda sondaj, acesta devine cât mai accesibil pentru o gamă largă de oameni, iar costul se schimbă treptat.

Baza reacției în lanț a polimerazei

Metoda PCR se realizează exclusiv în condițiile de laborator... Pentru implementarea sa, se folosesc enzime speciale care cresc de mai multe ori structura ADN-ului și ARN-ului pacientului. Cantitatea de ADN și ARN trebuie formată astfel încât să poată fi efectuată analiza vizuală. În timpul examinării, are loc o copie a secțiunii respective de ARN sau ADN, care este ideală pentru condițiile necesare.

Există o bază de date corespunzătoare în laborator, care indică structura exactă a diferiților agenți infecțioși. Datorită metodei PCR, puteți vedea nu numai agentul patogen, ci și calcula raportul cantitativ al acestuia.

Diagnosticul PCR implică, de asemenea, anumite inovații, printre care se pot distinge următoarele:

introducerea mutațiilor;
conexiunea fragmentelor de ADN individuale;
determinarea paternității etc.

Infecții detectate prin PCR

Diagnosticul PCR poate dezvălui următoarele procese infecțioase:

hepatită din următoarele soiuri: A, B, C, G;
Virusul Epstein-Barr, agentul cauzal al mononucleozei infecțioase;
citomegalovirus;
mycobacterium tuberculosis;
herpes tipurile 1 și 2;
multe infecții cu transmitere sexuală: ureaplasmoza, gardnereloza, chlamydia, micoplasmoza, tricomoniaza.
HPV și subspeciile sale oncogene;
encefalită și borrelioză transmisă de căpușe;
infecție candidală;
listerioză;
Infecția cu Helicobacter pylori.

Și acestea sunt doar câteva dintre cele mai frecvente infecții care pot fi detectate folosind PCR. Analiza sângelui PCR este utilizată activ în domeniul ginecologic al practicii medicale, precum și în domenii precum:

pulmonar;
fiziologic;
gastroenterologic;
oncologic;
multe alte ramuri ale medicinei.

Reguli pentru colectarea materialului pentru analiză

ADN-ul și ARN-ul străin pot fi detectate examinând o varietate de fluide biologice ale unei anumite persoane. Pentru a examina o persoană pentru prezența anumitor infecții cu transmitere sexuală, este necesar să se ia o probă de descărcare de gestiune din organele genitale (frotiu sau răzuire) ale pacientului și din urină.

Dacă devine necesar să se examineze o persoană pentru diferite tipuri de infecții (HIV, herpes, hepatită și altele), atunci se ia o analiză PCR, pentru care se folosește sângele pacientului.

Pentru a diagnostica o leziune herpetică, mononucleoza, trebuie să luați un tampon din gura pacientului. Pentru confirmarea CMVI, urina pacientului este luată pentru analiză. Există cazuri în care lichidul cefalorahidian este examinat pentru a afla cauzele anomaliilor neurologice care au apărut.

În același timp, un pneumolog examinează sputa și lichidul din pleura unui anumit pacient folosind metoda PCR.

Dacă un nou-născut suspectează o infecție intrauterină, medicii fac o analiză lichid amniotic la o femeie însărcinată și o bucată de țesut din placentă.

Furnizarea analizei: caracteristici ale procedurii și interpretarea rezultatelor

Toți pacienții examinați prin metoda PCR primesc cel mai fiabil rezultat. În acest caz, apariția erorilor este practic exclusă. Rezultatele acestei analize sunt pregătite suficient de rapid, ceea ce facilitează diagnosticul și asigură numirea la timp a măsurilor terapeutice.

Fiabilitatea rezultatului PCR depinde în mod direct de livrarea corectă a materialului pentru examinare. Materialul nu trebuie contaminat, altfel rezultatul testului nu va fi obiectiv. Cele mai importante recomandări înainte de a trece analiza PCR includ următoarele cerințe:

Este interzisă expunerea activității sexuale cu o zi înainte de analiză.
Un test de sânge pentru infecții trebuie făcut pe stomacul gol dimineața.
Urina este prezentată dimineața într-un recipient steril.

Rezultatul analizei va fi gata în 1,5-2 zile după procedura în cauză. Există situații în care rezultatul poate fi pregătit în aceeași zi.

Decodarea rezultatelor

Rezultatul acestui tip de examinare poate fi pozitiv sau negativ. Un rezultat negativ al testului de sânge indică faptul că nu există elemente infecțioase în materialul donat. Un număr mare de analize PCR efectuate arată o analiză negativă.

O analiză PCR pozitivă confirmă faptul că în materialul prezentat s-au găsit agenți infecțioși și că o calitate maximă, maximă tratament eficient bolnav.

Rezultatul poate fi pozitiv, dar nu există manifestări ale bolii. Aceasta indică fie debutul bolii, fie transportul acesteia. Dacă se detectează transportul bolii, atunci nu sunt necesare măsuri terapeutice. Trebuie doar să fii observat de un specialist. Exemple de astfel de boli sunt:

infecție cu papilomavirus;
herpes etc.

De obicei, acestea se găsesc în salivă, resturi din canalul cervical, uretra. Cu toate acestea, trebuie amintit că o persoană bolnavă poate infecta persoane absolut sănătoase, în ciuda faptului că această boală nu-l deranjează în niciun fel. Boala se poate transforma în formă cronică... Trebuie remarcat faptul că, în cazurile în care testul de sânge PCR a arătat rezultat pozitiv, numirea măsurilor terapeutice este pur și simplu necesară.

Analiza PCR are, de asemenea, o caracteristică cantitativă. Rezultatul cantitativ este evaluat numai de un specialist; este individual pentru diferite infecții. Pe baza caracteristicilor cantitative, medicul este capabil să înțeleagă cât de activ este un proces patologic dat, să stabilească stadiul exact al dezvoltării unei boli specifice. Analizând rezultatele obținute, specialistul poate selecta medicamentul necesar și, eventual, poate revizui doza medicamentului.

Precizia diagnosticului PCR

Experții oferă PCR 3 cele mai importante caracteristici, printre care se numără:

Precizie.
Specificitate.
Sensibilitate.

Diagnosticul infecțiilor prin PCR are o mare probabilitate de detectare a agenților infecțioși. Analiza PCR a sângelui și a altor fluide este foarte specifică. Cu ajutorul acestuia, puteți identifica cu ușurință un anumit proces infecțios. Diagnosticul PCR este extrem de sensibil. Dacă materialul testat conține o cantitate minimă de agenți infecțioși, metoda PCR va fi întotdeauna pozitivă.

Cel mai rar este un rezultat fals pozitiv. Dacă nu există infecție, atunci rezultatul este negativ.

PCR pentru procesul infecțios latent

Dacă o persoană este suspectată de a avea o ITS, atunci este prescris un test de sânge infecții ascunse... Bolile sexuale pot fi detectate numai prin examinarea pacientului. Boli precum:

chlamydia;
ureaplasmoza;
gonoree;
herpes;
gardnereloza;
micoplasma.

Infecțiile genitale de mai sus sunt destul de frecvente și în același timp insidioase. În stadiul inițial al dezvoltării bolii, acestea nu dau simptome vii, iar pacienții nu caută ajutor. Analiza PCR a sângelui, resturile de pe membrana mucoasă a uretrei și a canalului cervical sunt necesare dacă sunt suspectate aceste infecții.

ITS au un efect foarte negativ asupra sistemului reproductiv. Ele pot provoca infertilitate sau malformații la făt. În acest sens, înainte de a planifica o sarcină, trebuie să treceți un test PCR.

PCR pentru 12 infecții este populară. Diagnosticul prin metoda PCR 12 se efectuează grație livrării frotiurilor din organele genitale. Materialul este luat la 2 ore după actul de urinare. Cu 2 zile înainte de studiu, supozitoarele și dușurile nu trebuie introduse în vagin. Rezultatul analizei va fi gata în 2 zile.

Costul PCR variază în funcție de infecția investigată. Prețul variază de la 200 la 500 de ruble pentru fiecare infecție. Puteți intra și fi examinat într-un laborator privat pe cont propriu, fără recomandarea medicului.

Reacția în lanț a polimerazei este cunoscută de 30 de ani. Este utilizat pe scară largă în multe domenii, de la arheologie la genetică.

Este metoda PCR care ajută la stabilirea paternității, dar este cel mai adesea utilizată pentru a identifica diferite boli infecțioase din corpul uman.

Cum se efectuează și ce este analiza PCR? Vom încerca să răspundem la aceste întrebări în detaliu.

Analiza PCR - ce este?

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de înaltă precizie a diagnosticului genetic molecular, care permite detectarea diferitelor boli infecțioase și ereditare la om, atât în cele acute, cât și în cele acute stadiul cronic, și cu mult înainte ca boala să se poată manifesta.

Metoda PCR este absolut specifică și efectuată corect nu poate da un rezultat fals pozitiv. Adică, dacă nu există infecție, atunci analiza nu va arăta niciodată că este. Prin urmare, acum, foarte des, pentru a confirma diagnosticul, se ia o analiză PCR suplimentară pentru a determina agentul patogen și natura acestuia.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) a fost dezvoltată în 1983 de Carey Mullis (SUA), pentru care în 1993 a primit Premiul Nobel pentru chimie.

Care este avantajul acestei metode?

Diagnosticul prin această metodă vă permite să găsiți agentul patogen direct în gena conținută în materialele studiate. Aceasta este analiza cea mai precisă pentru infecțiile genitale, infecțiile latente, diferite boli cu transmitere sexuală.

Diferențe între diagnosticul PCR și alte metode de cercetare de laborator sunt după cum urmează:

metoda vizează identificarea agentului patogen în sine;
diagnosticarea prin metoda PCR este versatilă: pentru detectarea mai multor agenți patogeni;
boli, este suficient doar un eșantion biologic al pacientului;
metoda este extrem de sensibilă și nu este însoțită de alte reacții încrucișate.

În plus, avantajul diagnosticului PCR este că orice material biologic al pacientului este potrivit pentru analiză: sânge, descărcare de la organele genitale, urină, material seminal.

Ce infecții poate detecta un frotiu PCR?

Un număr mare de agenți infecțioși pot fi prezenți în organism, inclusiv cei „ascunși”, care nu se manifestă mult timp.

Analiza frotiului pentru PCR vă permite să identificați astfel de infecții:

ureplasmoza organelor genitale;
candidoză ();
herpes;
prezența celulelor canceroase;
evaluați starea hormonală;

Materialul de testare pentru PCR este de obicei spută, salivă, urină, sânge. Înainte de a efectua analiza, trebuie să vă pregătiți cu atenție pentru aceasta, după ce ați obținut consultarea prealabilă cu un medic.

Sângele pentru PCR se administrează de obicei pe stomacul gol. Rezultatele bune sunt prezentate de analiză atunci când materialul pentru cercetare este preluat din canalul cervical sau uretra. În acest caz, cel mai bine este să efectuați diagnosticarea PCR nu mai târziu de o zi după actul sexual.

Soiuri de PCR

PCR este utilizat în multe domenii pentru analiză și experimente științifice... Există diferite metode de analiză:

Transcriere inversă PCR(Reverse Transcription PCR, RT-PCR (eng.)) - utilizat pentru a amplifica, izola sau identifica o secvență cunoscută dintr-o bibliotecă de ARN.
PCR inversat(PCR invers (eng.)) - utilizat atunci când se cunoaște doar o mică secțiune din secvența dorită. Această metodă este utilă mai ales atunci când trebuie să determinați secvențele adiacente după introducerea ADN-ului în genom.
PCR imbricat (PCR imbricat) - utilizat pentru a reduce numărul de produse secundare ale reacției. Se folosesc două perechi de primer și se efectuează două reacții consecutive.
PCR asimetric(Engleză asimetrică PCR) - se efectuează atunci când este necesar să se amplifice în principal una dintre firele ADN-ului original. Utilizat în unele tehnici de secvențiere și analiză de hibridizare.
PCR cantitativă(PCR cantitativ, Q-PCR (eng.)) Sau PCR în timp real - este utilizat pentru a observa direct măsurarea cantității unui produs PCR specific în fiecare ciclu al reacției.
Step PCR (Touchdown PCR) - Această abordare reduce efectul legării nespecifice a primerului.
PCR specific grupului(eng. PCR-specific PCR) - PCR pentru secvențe corelate în cadrul unuia sau între tipuri diferite folosind grunduri conservatoare pentru aceste secvențe.

Dacă secvența nucleotidică a șablonului este cunoscută parțial sau deloc, pot fi folosiți primerii degenerați, secvența cărora conține poziții degenerate în care pot fi localizate orice baze. De exemplu, secvența de grund poate fi: ... ATH ..., unde H este A, T sau C.

Ce materiale biologice sunt testate?

Materialul pentru cercetarea PCR, în care este posibil să se identifice ADN-ul străin al unei bacterii sau ADN-ul sau ARN-ul unui virus, pot fi diverse medii biologice și fluide umane:

Urină. Poate fi utilizat pentru leziunile infecțioase ale tractului genito-urinar la bărbați și la organele urinare la femei (la bărbați, utilizarea urinei ca material înlocuiește răzuirea epitelială).
Spută. Este utilizat pentru diagnosticul tuberculozei și mai rar pentru diagnosticarea formelor respiratorii de chlamidie și micoplasmoză. Sputa în cantitate de 15-20 ml este colectată într-o sticlă sterilă (de unică folosință).
Fluide biologice... Sucul de prostată, lichidul pleural, cefalorahidian, lichidul amniotic, lichidul articular, spălarea bronhoalveolară, saliva sunt colectate conform indicațiilor.
Zgârieturi epiteliale din mucoase... De obicei utilizat pentru diagnosticarea bolilor cu transmitere sexuală (BTS), cum ar fi gonoreea, chlamydia, micoplasmoza, ureaplasmoza, tricomonoza, gardnereloza, herpesul și alte infecții care afectează membranele mucoase.
Biopsii. Cel mai adesea, biopsiile stomacului și ale duodenului sunt utilizate pentru a detecta infecția cu Helicobacter pylori.
Sânge, plasmă, ser... Utilizat pentru analiza PCR a virusurilor hepatitei B, C, D, G, herpes, CMV, HIV și genelor umane.

Cum să vă pregătiți pentru test?

Urina este prezentată dimineața într-un recipient steril.
Un test de sânge pentru infecții trebuie făcut pe stomacul gol dimineața.
Nu trebuie să fiți activ sexual cu o zi înainte de analiză.

Rezultatul analizei va fi gata în 1,5-2 zile după procedura în cauză. Există situații în care rezultatul poate fi pregătit în aceeași zi.

Decodarea analizei OCP

Procesul de interpretare a cercetării prezentate se remarcă prin simplitatea sa. Rezultatele analizei PCR pot fi obținute la 1,5-2 zile după livrarea materialului. În unele cazuri, rezultatul este gata chiar în prima zi, și asta pot însemna:

Rezultat negativ arată că nu există agent infecțios dorit în materialul diagnosticat.
PCR pozitivînseamnă că ADN-ul sau ARN-ul agentului patogen este prezent în corpul uman.

În unele cazuri, produce cuantificare microorganisme. Acest lucru este valabil mai ales pentru bolile cauzate de microorganisme oportuniste. Deoarece aceste bacterii prezintă efectele lor negative doar cu o cantitate în exces.

De asemenea analiza cantitativa PCR este importantă pentru alegerea tacticii terapeutice și pentru a controla tratamentul acestora infecții virale precum virusurile HIV și hepatita.

Cât de precis este diagnosticul PCR al infecțiilor?

Metoda PCR este extrem de precisă, specifică și sensibilă. Aceasta înseamnă că această analiză este capabilă să:

determina cu exactitate prezenta sau absenta infectiei;
specificați exact ce fel de infecție este (specificitate);
detectează infecția chiar și cu un conținut foarte scăzut de ADN microbian în material biologic,
care a fost examinată (sensibilitate).

Analiza PCR: preț și termeni

Prețul unui anumit test va depinde de infecția pentru care testați. Prețuri și termeni aproximativi:

ITS: 300-500 ruble, termeni - 1 zi;
Virusul Epstein-Barr, virusul papilomului uman, herpesul, citomegalovirusul: 300-500 ruble, interval de timp - 1 zi;
Hepatita A, B, C, D, G: analiza calitativa 650 ruble, analiză cantitativă 2000 ruble. Termeni - până la 5 zile;
Anticorpi împotriva virusului hepatitei C, total (anti-VHC) - 420 ruble;
Anticorpi împotriva virusului hepatitei C, IgM (IgM anti-VHC) - 420 ruble;
Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 ruble, termeni - 1 zi;
HIV (anticorpi și antigeni) - 380 de ruble;
ARN HIV, calitativ - 3.500 ruble;
ARN HIV, cantitativ - 11.000 ruble.

Pentru a economisi bani, puteți alege un pachet fix de analize. Acest serviciu este furnizat de majoritatea clinicilor unde puteți efectua analiza prin metoda PCR (invitro, onclinice etc.).

Pentru un tratament de succes, cel mai important punct este un diagnostic rapid și fără erori. Recent, lista metodelor și capacităților centrelor de diagnostic, policlinicilor și spitalelor din domeniul diagnosticului s-a extins constant. După apariția unei tehnici relativ noi - analiza PCR, această metodă a câștigat rapid aderenții profesioniștii din domeniul medical, deoarece este adesea indispensabil în identificarea bolilor infecțioase.

Domeniul de aplicare al metodei bazate pe reacția în lanț a polimerazei nu se limitează la medicamente, dar diagnosticul PCR este cel mai utilizat pentru detectarea diferitelor boli.

Avantajele incontestabile ale PCR includ următoarele:

Sensibilitate foarte mare. De obicei, ei vorbesc despre sensibilitatea de la 95 la 100%, dar acestea sunt datele medii. Acest indicator diferă pentru diferitele microorganisme. Deci, pentru hepatita C, aceasta nu este mai mică de 97% (cu condiția ca toate cerințele să fie îndeplinite) și pentru determinarea ureaplasmozei - cel puțin 99%. Această sensibilitate este cea mai mare la acest moment, prin urmare, metoda nu are aproape niciun concurent în această caracteristică.
Posibilitatea de aplicare în primele etape.Într-un moment în care alte metode de diagnostic nu sunt încă capabile să identifice agentul patogen datorită cantității sale mici din eșantion, PCR oferă deja rezultatul corect. Este posibil să se detecteze prezența unui agent patogen chiar dacă există un singur specimen și, în unele cazuri, doar un fragment de microb. Din acest motiv, metoda este utilizată și pentru patologiile cronice sau latente, precum și în stadiul de incubație.
O gamă largă de rezultate. Analiza este capabilă să identifice mai mulți agenți patogeni în același timp; acest lucru nu necesită manipulări repetate. Uneori este posibil să se găsească agenți patogeni care nici măcar nu au fost suspectați în diagnosticul inițial.
Versatilitatea probelor. Ca probă, pot fi prezentate probe de sânge, salivă, spută, păr, secreție vaginală, celule din diferite țesuturi.
Viteza de obținere a rezultatelor.În majoritatea cazurilor, un răspuns este primit în 5-6 ore. Pentru analiza culturii care abordează reacția în lanț a polimerazei în termeni de precizie, același rezultat poate fi obținut într-o perioadă de câteva zile până la câteva săptămâni.
Cuantificarea agentului patogen. Acest parametru vă permite să determinați titrul microbilor din material și această proprietate este adesea necesară pentru a evalua eficacitatea tacticii de tratament selectate.
Identificarea microorganismului în sine, nedeterminarea reacțiilor acestuia. Majoritatea analizelor se bazează pe răspunsul agentului patogen la substanțe chimice, colorare etc. Această metodă de diagnostic vă permite să detectați microbul direct, și nu semnele indirecte, anticorpii etc.

În ciuda unei game atât de largi de avantaje, metoda prezintă unele dezavantaje:

Contaminarea probei cu o probă anterioară poate duce la detectarea falsă a microorganismelor. Acest lucru se întâmplă atunci când instrumentele sau reactivii implicați în analiză sunt contaminați. Chiar și în aer există fragmente de microbi care pot afecta rezultatul, prin urmare, în astfel de laboratoare, trebuie instalat un filtru biologic cu gradul maxim de purificare a aerului.
Rezultat negativ fals. Chiar și cu toate manifestările evidente ale bolii, uneori se obțin date negative. Motivul pentru aceasta se află într-un loc greșit pentru prelevare de probe, prin urmare personalul de laborator trebuie să aibă calificări, cunoștințe și experiență suficiente.
Evaluarea datelor ar trebui efectuată exclusiv de către medicul curant, deoarece interpretarea rezultatelor analizei PCR este un proces complex. Un răspuns pozitiv nu înseamnă întotdeauna boală. Faptul este că, după ce boala a fost tratată cu succes, fragmente ale agentului patogen sunt prezente în sânge pentru o lungă perioadă de timp, astfel încât numai un specialist foarte calificat poate ajunge la o concluzie.
Costul ridicat al diagnosticării utilizând reacția în lanț a polimerazei. Prețul se datorează echipamentelor scumpe și cerințelor ridicate pentru condițiile de laborator și calificările personalului.

Condiții preliminare pentru obținerea datelor exacte în laboratoarele PCR:

mecanismul corect de prelevare și transportul corect al acestora la laborator;
respectarea exactă a metodelor în timpul analizei;
sterilitate ridicată și automatizare maximă a procesului;
utilizarea instrumentelor de unică folosință;
sistem intern de control de laborator pentru validarea datelor.

Cu condiția ca toate cerințele să fie îndeplinite, pe baza datelor obținute utilizând tehnica PCR, este posibil nu numai să se determine boala, ci să se prevadă cursul acesteia și să se întocmească un algoritm de tratament.

Esența metodei

Reacția în lanț a polimerazei vă permite să copiați și să reproduceți rapid firele de ADN ale microbului care a cauzat boala. Pentru ca procesul să se desfășoare rapid, se utilizează preparate enzimatice speciale care accelerează replicarea și construirea lanțului nucleotidic.

După finalizarea completă a procedurii, prezența agentului patogen în probă crește de milioane de ori, după care identificarea și identificarea acestuia nu reprezintă o problemă.

Asistentul de laborator poate compara proba primită cu cele prezentate în baza de date și o poate denumi cu exactitate, precum și poate determina cantitatea inițială a acesteia.

În plus, tehnica vă permite să clonați secțiuni individuale ale lanțului ADN, să provocați mutațiile necesare în acestea, să uniți și să combinați secțiuni între ele.

Aplicații

Cele mai răspândite diagnostice PCR primite în medicină. Cu ajutorul acestuia, puteți determina boli virale, infecțioase, ereditare, iar acest lucru se poate face nu numai în faza activă, ci și imediat după infecție.

Domenii de medicină în care metoda PCR este utilizată activ pentru diagnostic:

urologie și ginecologie - pentru depistarea majorității bolilor cu transmitere sexuală (ureaplasmoză, herpes, sifilis, gonoree, gardnereloză, tricomonioză, chlamidie, HIV, micoplasmoză, papilomavirus uman, candidoză etc.);
pneumologie - cu tuberculoză sau pneumonie de natură bacteriană sau virală;
gastroenterologie - cu helicobacterioză;
în hematologie - cu citomegalovirus, diferite oncovirusuri sanguine;
în domeniul bolilor infecțioase - pentru depistarea difteriei, salmonelozei, mononucleozei, listeriozei, hepatitei de origine virală, encefalitei;
în oncologie - pentru a determina cancerul de sân, leucemia, limfomul.

Această metodă este utilizată și în neonatologie, pediatrie, oftalmologie, neurologie - în aproape orice ramură a medicinei s-a dovedit a fi necesară.

Videoclipul detaliază ce infecții pot fi detectate folosind reacția în lanț a polimerazei.

Majoritatea bolilor cu transmitere sexuală sunt diagnosticate rapid și cu succes tocmai datorită diagnosticului PCR. Pe lângă identificarea agentului patogen, această metodă vă permite să aflați tulpina specifică a microorganismului, ceea ce face posibilă alegerea celui mai eficient medicament pentru tratament.

În plus față de medicină, metoda PCR este utilizată în alte domenii:

Știința criminalistică și știința criminalistică - ajută la stabilirea identității unui criminal prin compararea materialului genetic al unui suspect cu probele găsite la locul crimei.
Stabilirea paternității - se compară seturile genetice reproduse ale părintelui și copilului, se găsesc fragmente identice, pe baza cărora se poate judeca gradul relației lor.
Știința folosește tehnica în cursul experimentelor, aplicând mutații genetice, stabilind relația ramurilor evolutive ale organismelor individuale etc.

Diagnostic PCR în venerologie

Multe infecții care provoacă boli cu transmitere sexuală etapele inițiale sunt foarte asemănătoare în manifestări și simptome, prin urmare este destul de dificil să le diferențiem. În același timp, identificarea timpurie a unui agent infecțios permite începerea tratamentului cât mai devreme posibil și reducerea timpului de tratament la minimum, evitând dezvoltarea posibilelor complicații.

Reacția în lanț a polimerazei este un mecanism eficient pentru identificarea acestor grupuri de boli genitale:

infecții bacteriene (sifilis, donovanoză, gonoree, chlamydia etc.);
patologii virale (papilomatoză, condilomatoză, HIV, herpes genital etc.);
ciuperci (afte, balanopostite etc.)

În dermatovenerologie, proprietatea acestei tehnici este utilă în special pentru a găsi agenți infecțioși în perioadele de remisie sau în timpul transportului, când o persoană poate infecta parteneri fără a avea simptome ale bolii.

Progresul analizei reacției în lanț a polimerazei

Analiza PCR are loc în 4 etape principale:

pregătirea materialului pentru copiere;
combinarea unui fragment de ADN și a unui primer;
copierea setului genetic al materialului studiat;
identificarea și evaluarea kitului ADN rezultat.

Etapa 1

Eșantionul este încălzit la o temperatură de 94-98 ° C într-un dispozitiv special - un amplificator, care este programat pentru a menține temperaturi precise cu o eroare scăzută. Temperatura setată este menținută timp de un minut sau două. Acest lucru este necesar pentru denaturarea ADN, astfel încât helica dublă să se împartă în două fire separate.

Etapa 2

Temperatura din termociclator este redusă la 72-75 ° C pentru ca grundul să recunoască o regiune similară a catenei ADN și să se asocieze cu aceasta.

Grundurile sunt reactivi speciali care sunt potriviți pentru un singur tip de agent patogen. Dacă este necesar să se analizeze mai mulți agenți patogeni, atunci numărul necesar de grunduri se adaugă probei.

În acest stadiu, ADN-ul își reproduce șablonul folosind un primer.

Capacitățile laboratorului sunt limitate de disponibilitatea primerilor pentru microorganisme specifice, astfel încât gama de capacități este determinată de disponibilitatea unor astfel de probe.

Etapa 3

În acest segment, apare o creștere a materialului genetic al agentului patogen. Enzima se apropie de primer cu șablonul și reproduce o nouă catenă de ADN, identică cu cea conținută în catenă originală.

Când se încheie sinteza, se finalizează un ciclu complet al reacției în lanț a polimerazei. În timp, durează în medie până la 3 minute. În acest timp, există o dublare a materialului. O creștere suplimentară a numărului de lanțuri are loc exponențial, iar până la sfârșitul analizei reușește să treacă 50-80 de cicluri.

Etapa 4

O etapă care necesită atenție și îngrijire specială din partea personalului.

Determinarea microorganismului are loc folosind electroforeză sau semne de colorare. Atunci când se utilizează electroforeza, factorul decisiv este lungimea fragmentelor de ADN și, atunci când se utilizează etichete, dezvoltarea culorii în timpul reacției enzimatice.

Soiuri de analize PCR

Există multe variante ale acestor diagnostice PCR. Alegerea unei anumite metode depinde de mulți factori: diagnosticul prezumtiv, capacitățile laboratoarelor disponibile, metoda de eșantionare etc.

Cele mai frecvent utilizate tipuri de PCR sunt:

cuibărit;
pășit;
cu un început fierbinte;
virtual;
asimetric;
în timp real etc.

De preferință, se utilizează PCR în timp real, deoarece metoda se caracterizează prin cele mai precise rezultate și cea mai rapidă viteză de procesare a datelor. După aplicarea sa, concluzia este gata într-o oră sau două.

Metoda este utilizată pe scară largă în pediatrie pentru a detecta viruși și infecții ale sângelui, boli genetice, infecții cu TORCH. Neonatologii prescriu astfel de diagnostice în cazurile cu probleme literalmente din primele zile de viață. Uneori, un astfel de diagnostic vă permite să detectați infecția apelor intrauterine, care constituie un pericol pentru dezvoltarea fătului în perioada de formare activă.

Dacă un medic emite o sesizare pentru o examinare folosind o reacție în lanț a polimerazei, atunci el trebuie să clarifice ce tip de biomaterial trebuie furnizat pacientului și cum să se pregătească pentru prelevare.

Test de sange

Sângele este luat ca biomaterial pentru testarea dacă sunt suspectate HIV, hepatita virală, toxoplasma, herpesul genital și citomegalie. Pentru majoritatea acestor agenți patogeni, înainte de a utiliza această metodă, diagnosticul s-a bazat pe detectarea anticorpilor împotriva agentului patogen, ceea ce a întârziat foarte mult detectarea microbilor într-un moment în care anticorpii nu erau încă produși.

Înainte de a dona sânge pentru diagnostic, în acest caz, nu sunt necesare preparate speciale, dar este mai bine dacă proba se ia pe stomacul gol. Singura circumstanță care poate distorsiona grav rezultatele este aportul de antibiotice, astfel încât nașterea trebuie să fie precedată de un interval de timp după administrarea unor astfel de medicamente de câteva zile sau săptămâni, în funcție de tipul de antibiotic.

Recent, în cele mai moderne clinici, sistemele de vid sunt folosite pentru a colecta sânge pentru PCR, care dăunează minim pieleși minimizați probabilitatea de contaminare din aer, instrumente sau mâinile tehnicienilor de laborator care intră în probă.

Analiza frotiului

Este utilizat atât în ginecologie, cât și în venerologie, pentru a identifica bolile cu transmitere sexuală. Adesea, PCR frotiu este prescris în timpul sarcinii pentru a identifica factorii ascunși care pot afecta negativ formarea fătului sau evoluția sarcinii.

Pregătirea pentru selectarea materialului este de a exclude complet relațiile sexuale cu câteva zile înainte de procedură. Dusarea cu permanganat de potasiu sau infuzii de plante este, de asemenea, imposibilă. În zilele critice și la 2 zile după acestea, nu se ia un frotiu pentru analiza PCR.

Selectarea biomaterialului se efectuează în laborator din vagin, colul uterin, canalul cervical sau uretra.

Analiza PCR a unui frotiu vă permite să identificați un agent patogen care este rezistent la un anumit tip de antibiotic. În plus, indicațiile pentru acest tip de examen de diagnostic sunt:

sarcină complicată fără un motiv aparent;
evoluția acută a bolii venerice;
presupusul curs cronic al unei boli venerice;
identificarea cauzelor infertilității sau avorturilor spontane.

Analiza scaunului

Analiza scaunului utilizând reacția în lanț a polimerazei este prescrisă de un specialist pentru a clarifica prezența unei infecții. Pregătirea pentru prelevarea unei probe de scaun pentru PCR este următoarea:

excludeți laxativele sub formă de supozitoare, uleiuri sau medicamente orale în câteva zile;
nu utilizați medicamente sau produse în ajun care să dea fecalelor o culoare pronunțată.

Cel mai bine este să livrați materialul pentru determinarea PCR într-un recipient special pentru scaun cu un băț. Interiorul recipientului este steril; prin urmare, nu trebuie șters sau clătit. În timpul eșantionării, este important să monitorizați pentru a nu atinge interiorul receptorului și nu ar trebui să existe urme de urină în probă. Utilizarea clismelor este interzisă înainte de selecție.

Analiza urinei

Un astfel de studiu folosind PCR vă permite să extrageți o probă de ADN a unui virus sau bacterie. Cel mai bine este să colectați urina dimineața pe stomacul gol. Cel mai bun dintre toate, dacă acest lucru se întâmplă direct în laborator.

Condiții obligatorii de pregătire pentru obținerea rezultatelor testului de urină într-un laborator cu reacție în lanț a polimerazei:

rezista la 3 saptamani dupa administrarea antibioticelor;
nu beți și nu mâncați înainte de a lua lichidul;
interzicerea sexului vaginal cu o zi înainte de prelevarea probei;
prima porțiune a materialului trebuie plasată în recipient după trezire.

Interpretarea rezultatelor

Interpretarea rezultatelor diagnosticului este efectuată de specialistul care a trimis pacientul pentru studiul PCR. Protocolul emis de laborator poate include un rezultat PCR negativ sau pozitiv:

Negativ - caz în care nu au fost găsite fragmente ale agentului cauzal al presupusei boli, adică persoana este sănătoasă și nu a suferit recent această boală.
Pozitiv - ARN sau ADN al agentului patogen a fost găsit în probă și persoana are nevoie de tratament.

Nu merită să interpretăm în mod independent datele obținute, deoarece normele de vârstă pot diferi semnificativ, iar titrurile diferite indică etape complet diferite ale bolii și abordări ale terapiei.

Înarmat cu rezultatele diagnosticului PCR, medicului îi va fi ușor să stabilească lista măsurilor de tratament necesare.

Acuratețea diagnosticului PCR a făcut această tehnică indispensabilă în diagnosticarea unei liste imense de boli și a făcut posibilă identificarea și eliminarea mai eficientă a proceselor patogene din corpul uman.

La sfârșitul articolului vezi
Reacție în lanț a polimerazei (PCR, PCR) inventat în 1983 de Carey Mullis (om de știință american). Ulterior, a primit Premiul Nobel pentru această invenție. În prezent, diagnosticul PCR este una dintre cele mai exacte și sensibile metode pentru diagnosticarea bolilor infecțioase.
Reacția în lanț a polimerazei (PCR)- o metodă experimentală de biologie moleculară, o modalitate de a crește semnificativ concentrațiile mici de anumite fragmente de acid nucleic (ADN) într-un material biologic (eșantion).
Metoda PCR se bazează pe dublarea multiplă a unei anumite regiuni ADN folosind enzime în condiții artificiale (in vitro). Ca rezultat, cantitatea de ADN este acumulată suficientă pentru detectarea vizuală. În acest caz, numai secțiunea care îndeplinește condițiile specificate este copiată și numai dacă este prezentă în eșantionul studiat.
Pe lângă simpla creștere a numărului de copii ADN (acest proces se numește amplificare), PCR permite multe alte manipulări cu material genetic (introducerea mutațiilor, îmbinarea fragmentelor de ADN) și este utilizat pe scară largă în practica biologică și medicală, de exemplu, pentru diagnosticarea bolilor (ereditare, infecțioase), pentru stabilirea paternității, pentru clonarea genelor, introducerea mutațiilor, izolarea genelor noi.

Specificitate și aplicare

Efectuarea PCR

Pentru a efectua PCR în cel mai simplu caz, sunt necesare următoarele componente:

Șablon ADN care conține regiunea ADN care urmează să fie amplificată;
două grunduri complementare capetelor fragmentului dorit;
ADN polimerază termostabilă;
trifosfați deoxinucleotidici (A, G, C, T);
Ioni Mg2 + necesari pentru ca polimeraza să funcționeze;
soluție tampon.

PCR se efectuează într-un amplificator - un dispozitiv care asigură răcirea și încălzirea periodică a tuburilor, de obicei cu o precizie de cel puțin 0,1 ° C. Pentru a evita evaporarea amestecului de reacție, în eprubetă se adaugă un ulei cu fierbere ridicată, de exemplu, vaselină. Adăugarea de enzime specifice poate crește randamentul reacției PCR.
Progresul reacției

De obicei, atunci când se efectuează PCR, se efectuează 20 până la 35 de cicluri, fiecare dintre acestea constând din trei etape. Șablonul de ADN cu catenă dublă este încălzit la 94 - 96 ° C (sau 98 ° C dacă se folosește o polimerază deosebit de termostabilă) timp de 0,5 - 2 minute pentru a permite firelor de ADN să se separe. Această etapă se numește denaturare - legăturile de hidrogen dintre cele două lanțuri sunt distruse. Uneori, înainte de primul ciclu, amestecul de reacție este preîncălzit timp de 2 - 5 minute pentru a denatura complet șablonul și primerii.
Când firele s-au dispersat, temperatura este redusă astfel încât grundii să se poată lega de șablonul monocatenar. Această etapă se numește recoacere. Temperatura de recoacere depinde de grund și este de obicei aleasă cu 4 - 5 ° C sub punctul lor de topire. Timp de etapă - 0,5 - 2 minute.

ADN polimeraza replică firul șablon folosind un primer ca sămânță. Aceasta este etapa de alungire. Temperatura de alungire depinde de polimerază. Polimerazele utilizate frecvent sunt cele mai active la 72 ° C. Timpul de alungire depinde atât de tipul ADN polimerazei, cât și de lungimea fragmentului amplificat. De obicei, timpul de alungire este de un minut pentru fiecare mie de perechi de baze. După sfârșitul tuturor ciclurilor, se efectuează adesea o etapă suplimentară de alungire finală pentru a finaliza construcția tuturor fragmentelor monocatenare. Această etapă durează 10-15 minute.
Pregătirea materialului pentru cercetare și transportarea acestuia la laborator

Pentru o analiză reușită, este important să colectați corect materialul de la pacient și să îl pregătiți corespunzător. Se știe că în diagnosticul de laborator majoritatea erorilor (până la 70%) sunt făcute tocmai în etapa de pregătire a probei. Sistemele de vid sunt utilizate în prezent pentru preluarea sângelui în laboratorul INVITRO, care, pe de o parte, traumatizează minim pacientul și, pe de altă parte, permit preluarea materialului în așa fel încât să nu intre în contact nici cu personalul sau mediu inconjurator... Acest lucru evită contaminarea (contaminarea) materialului și asigură obiectivitatea analizei PCR.

ADN - acidul dezoxiribonucleic este un polimer biologic, unul dintre cele două tipuri de acizi nucleici care asigură stocarea, transmiterea din generație în generație și implementarea programului genetic pentru dezvoltarea și funcționarea organismelor vii. Rolul principal al ADN-ului în celule este stocarea pe termen lung a informațiilor despre structura ARN și a proteinelor.

ARN - acid ribonucleic - este un polimer biologic similar în structura sa chimică cu ADN-ul. Molecula de ARN este construită din aceleași unități monomerice - nucleotide ca ADN. În natură, ARN-ul există de obicei ca un singur fir. La unele virusuri, ARN-ul este purtătorul informațiilor genetice. În celulă, joacă un rol important în transferul de informații de la ADN la proteine. ARN-ul este sintetizat pe un șablon de ADN. Acest proces se numește transcriere. Există regiuni în ADN care conțin informații responsabile pentru sinteza a trei tipuri de ARN, care diferă prin funcțiile lor: ARN informațional sau AR de mesager (ARNm), ribozomal (ARNr) și transport (ARNt). Toate cele trei tipuri de ARN sunt implicate într-un fel sau altul în sinteza proteinelor. Cu toate acestea, informațiile privind sinteza proteinelor sunt conținute numai în ARNm.

Nucleotidele - unitatea bazică care se repetă în moleculele de acid nucleic, produsul component chimic bază azotată, zahăr cu cinci atomi de carbon (pentoză) și una sau mai multe grupări fosfat. Nucleotidele prezentate în acizi nucleici conțin o grupare fosfat. Sunt denumite în funcție de baza azotată pe care o conțin - adenină (A) care conține adenină, guanină (G) - guanină, citozină (C) - citozină, timină (T) - timină, uracil (U) - uracil. ADN-ul conține 4 tipuri de nucleotide - A, T, G, C, ARN conține și 4 tipuri - A, U, G, C. Zaharul din toate nucleotidele ADN este deoxiriboză, ARN-ul este riboză. Când se formează acizi nucleici, nucleotidele, prin legare, formează coloana vertebrală zahăr-fosfat a moleculei, pe o parte a căreia există baze.

Primer - ADN scurt utilizat pentru a replica șablonul șablon. Fiecare dintre grunduri este complementar cu unul dintre firele șablonului cu două fire, încadrând începutul și sfârșitul regiunii amplificate.

Literatură

Glick B., Pasternak J. Biotehnologie moleculară. Principii și aplicații. Pe. din engleza - M.: Mir, 2002. - 589 p., Ill. ISBN 5-03-003328-9
Shchelkunov S.N. Inginerie genetică - Novosibirsk: Sib. univ. editura, 2004. - 496 p.; bolnav. ISBN 5-94087-098-8
Patrushev L.I. Sisteme genetice artificiale - Moscova: Nauka, 2005 - 2 volume - ISBN 5-02-033278-X

IMPORTANT!

Informațiile din această secțiune nu pot fi utilizate pentru autodiagnosticare și auto-medicare. În caz de durere sau altă exacerbare a bolii, numai medicul curant trebuie să prescrie teste de diagnostic. Pentru un diagnostic și prescrierea corectă a tratamentului, trebuie să vă adresați medicului dumneavoastră.

În medicina modernă PCR analiza fluidelor corporale este extrem de precisă și informativă. Cu ajutorul acestei analize, se relevă prezența particulelor virale și microbiene în organism, chiar dacă bolile sunt latente și nu prezintă niciun simptom.

Ce înseamnă să vă atribuiți o analiză PCR? Această prescurtare înseamnă metoda reacției în lanț a polimerazei - acesta este un mod special de realizare cercetări de laborator... Cu această metodă, materialul biologic primit de la pacient este plasat într-un aparat special. La mediul de testare se adaugă un set de enzime reactive, care ajută la reproducerea materialului genetic al agentului patogen (virus sau microb). În timpul reacției, sunt reproduse un număr mare de copii de ADN sau ARN, ceea ce face posibilă identificarea atât a infecțiilor virale, cât și a celor microbiene prin comparație cu baza de date.

Ce înseamnă rezultatul analizei PCR? Dacă există un agent cauzal al unor infecții în corpul uman, chiar ascunse, această analiză va dezvălui nu numai prezența sa, ci și cât de mult este prezentă această infecție în organism.

Pentru analiza infecțiilor prin metoda PCR, este posibil să se examineze toate fluidele biologice ale corpului - sânge, urină, salivă, secreții genitale, mucus din gât și nas. Pentru analiză, este necesar foarte puțin material, deoarece dacă sunt disponibili agenți patogeni, datorită reproducerii copiilor lor, concentrația informațiilor genetice este adusă astfel încât să identifice un microb sau virus și să determine tipul acestuia. Precizia analizei PCR este foarte mare, cu ajutorul acestei analize este posibil astăzi să se determine aproape toate infecțiile virale, microbiene și de altă natură.

Dar ce este cel mai adesea dezvăluit de analiza PCR? Lista infecțiilor care pot fi detectate prin această metodă include infecțioase, inclusiv infecții periculoase din punct de vedere social, cum ar fi tuberculoza sau hepatita B și C. Aceeași metodă poate detecta infecția cu HIV, infecțiile cu chlamydial și ureaplasma, micoplasmoza atât a sistemului respirator, cât și a organelor genitale. Cu ajutorul acestei analize, se detectează aftele, vaginoza bacteriană, tricomoniaza. Capacitățile acestei metode permit detectarea infecțiilor ascunse - herpes de diferite tipuri, HPV (papilomavirus), precum și identificarea unui microb special responsabil pentru dezvoltarea ulcerelor de stomac - Helicobater.

Astăzi, puteți efectua o analiză PCR în aproape orice laborator privat sau public. Aceste tipuri de analize sunt efectuate pentru toată lumea, copii și adulți. În funcție de scopul analizei, se analizează diferite materiale biologice în funcție de sex.

Deci, analiza PCR la bărbați se efectuează pentru sânge sau urină, secreție uretrală, mucus din faringe sau nas, suc de prostată sau chiar material seminal. Analiza PCR la femei este posibilă în sânge și urină, secreții vaginale, deversări din uretra, mucus nazal și faringian.

Foarte des, în timpul sarcinii se folosește o analiză PCR, cu ajutorul acesteia, infecțiile latente sunt detectate în secrețiile vaginale sau în sânge, necesitând o monitorizare specială în această perioadă și, uneori, un tratament adecvat.

PCR modul în care este luată analiza

O analiză a infecțiilor prin această metodă este prescrisă de un medic, adesea colectarea materialului se efectuează imediat în cabinetul unui medic - un urolog sau ginecolog. Cum se face analiza PCR?

Materialul studiat este amestecat cu reactivi în laborator și reacția este așteptată. În prezența agenților patogeni, copii ale ADN-ului sau ARN-ului lor se înmulțesc. Aparatul compară fragmentele identificate de material genetic cu bazele de date și identifică cu exactitate agentul cauzal al infecției. Dacă este necesar, este indicată și cantitatea de agent patogen din anumite fluide corporale. De obicei, studiul nu durează mai mult de 1-2 zile, dacă este necesar, se efectuează analize exprese.

De unde vine analiza PCR? Acest lucru va depinde de ce tipuri de agenți patogeni sunt așteptați. Dacă este HIV sau hepatită - se ia sânge, dacă este o infecție genitală - se ia un frotiu din uretra sau din vagin. Dacă suspectați mononucleoză sau herpes, se ia un tampon de gât. De asemenea, pot fi utilizate urină, lichid cefalorahidian, descărcare de la răni, spută etc.

Test de sânge PCR

Pentru rezultate precise și diagnosticarea infecțiilor, este important să donați sânge dimineața pe stomacul gol. Un test de sânge prin PCR este capabil să identifice agenții patogeni boli periculoase- HIV, hepatită, sifilis. În perioadele de exacerbare și activitate a virusului, virusurile herpetice, papiloamele și altele pot fi detectate în sânge.

Analiza PCR: pregătire

Pregătirea corectă este esențială pentru ca analiza să fie absolut exactă. Cel mai simplu mod este să vă pregătiți pentru un test de sânge, nu există restricții privind dieta sau activitatea, sângele trebuie donat dimineața, pe stomacul gol. Analiza urinei este luată după spălarea organelor genitale, din porțiunea din mijloc într-un recipient special steril. Analiza PCR a tractului genital merită atentie speciala deci este important să știi să te pregătești. Cu o zi înainte de examinare, sexul este interzis, se recomandă să nu urinezi înainte de examinare. Cu menstruația la femei, data analizei este amânată 3-5 zile de la momentul ultimei descărcări.

Cât durează analiza PCR?

Analiza, în funcție de capacitățile laboratorului, poate dura de la câteva ore la câteva zile. În medie, câte zile se face analiza PCR? De obicei, sunt una sau două zile. În caz de urgență, analiza poate fi efectuată în aceeași zi, după câteva ore.